【背景简介】
谷氨酸脱羧酶（GAD）是神经递质抑制剂-氨基丁酸（GABA）的生物合成酶。GAD的两种形式，65 Kda和67 Kda，是由一个单一基因产生的，并且具有高度的同质性。65-Kda GAD和67-Kda GAD在脑细胞和胰岛细胞中被鉴定出来，并在人、大鼠和小鼠的胰腺中均有差异表达。由于糖尿病是一种涉及-细胞破坏的慢性自身免疫性疾病，在临床前（无症状）阶段早期和准确地预测疾病的发病将有助于干预胰岛细胞的破坏，并保持最大可能的细胞质量。对高危人群进行所有三种自身抗体的筛查将有助于预防或减缓疾病的发病。高危（无症状）人群，对两种或两种以上的自身抗体呈阳性，通常在未来5-7年容易发生IDDM。
【检测原理】
微孔中包被有纯化的谷氨酸脱羧酶。如果血清样品中含有特异性的抗谷氨酸脱羧酶IgG，抗体就会结合到固相的抗原上。洗板后去除未结合的血清蛋白。再加入酶标记的羊抗人IgG（酶联物），与固相的抗体—谷氨酸脱羧酶复合物结合。再次洗板，去除非结合的酶联物。再加入底物液，温育显色后，加入终止液。最后在酶标仪读数。显色的强度与血清样品中抗谷氨酸脱羧酶IgG自身抗体的浓度成正比。
【试剂盒组成成分】
微孔板（带板架）12×8
酶联物（6倍浓缩）2 × 1.0 ml
样品稀释液（5倍浓缩）1 × 25.0 ml
酶联物稀释液 1 × 10.0 ml
标准品（1、2、3）（人血清）1 × 1.5 ml
低质控（人血清）1 × 1.5 ml
高质控（人血清）1 × 1.5 ml
底物液(PNPP) 1 × 15.0 ml
洗涤液（25倍浓缩）1 × 20.0 ml
终止液(1N NaOH) 1 × 6.0 ml
【检测步骤】
实施谷氨酸脱羧酶的抗体检测试验前，取所需的微孔板条。如12条同时检测，即42份血清样品一起进行双份检测。
1) 取实验所需微孔板条置于板架上。
2) 加100 µl (0.1 ml) 标准品，高/低质控品，稀释样品至相应微孔中。设A1和B1作为样品空白对照。
3) 封板纸封板，室温下(25℃±1℃)温育1小时。
4) 温育完毕后，倒掉孔内反应液，并在吸水纸上拍打几次。如用自动洗板机，每孔用300 µl稀释洗涤液洗板3次。如手工用洗瓶，小心向微孔内加稀释洗涤液，洗涤过程避免产生气泡，共洗3次，每次洗板都要在吸水纸上拍干，去除残留液滴。
5) 除A1和B1空白对照孔外，加100 µl (0.1 ml)稀释酶联物至各孔中
6) 封板，置黑暗处，于室温下(25℃±1℃)温育1小时。
7) 温育后，按上述步骤4洗板。
8) 加100 µl底物液至各孔中（包括A1和B1空白对照孔）。
9) 盖板，置黑暗处，于室温下(25℃±1℃)温育30分钟。
10) 温育后，以加底物液的同样顺序和速度，加50 µl (0.05 ml)终止液至各孔中。
11) 利用A1和B1空白对照孔对酶标仪调零。在405nm处读数。空白对照孔，应没有样品和酶联物，但含底物液和终止液
12) 计算结果
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